集胞蓝细菌PCC 6803中CcmK2蛋白多克隆抗体的制备与检测

本文刊于:《华中农业大学学报》 2018年第1期

关键词:
集胞蓝细菌PCC 6803;羧酶体;Western blot;二氧化碳浓缩机制

Keywords
Synechocystis sp.PCC 6803;carboxysome;Western blot;CO2 concentrating mechanism
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摘要
     CcmK2蛋白是集胞蓝细菌PCC 6803羧酶体外壳蛋白的主要组分,在羧酶体的组装与功能行使方面扮演重要角色。为解析其功能,本研究构建了原核表达载体pET28a-CcmK2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达带有6个组氨酸标签的CcmK2重组蛋白。通过金属亲和层析技术,将CcmK2重组蛋白纯化后免疫家兔,制备抗CcmK2多克隆抗体。基于Dot blot分析的结果显示:该多克隆抗体能够有效检测蓝细菌CcmK2蛋白;进一步的抗体特异性分析显示,CcmK2多克隆抗体与其他羧酶体外壳蛋白存在微弱的抗原抗体反应;最后,通过Western blot分析证实该多克隆抗体能够特异而灵敏地检测集胞蓝细菌PCC 6803中CcmK2的丰度。


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