珠芽景天的鉴定、黄酮类成分含量测定及抗肿瘤活性研究

Studies on Identification, Flavonoids Determination and Antitumour Activities of Sedum bulbiferum Makino

作者: 专业:药物化学 导师:万定荣 年度:2012 学位:硕士  院校: 中南民族大学

Keywords

        珠芽景天系景天科景天属植物珠芽景天(别名马尿花)Sedum bulbiferumMakino的新鲜或干燥全草,是我国的一种民族民间药。春末初夏时采收,鲜用或晒干备用。文献记载,该品用于食积腹痛、风湿瘫痪、疟疾等病症,尚有止血作用,在湘西土家族还用于治疗痈肿疔疖、跌打损伤、烫伤、蛇伤等。珠芽景天广泛分布于我国多个省区,野生资源丰富,有一定的开发利用价值。关于珠芽景天的生药学及活性研究报道很少,尚缺乏系统的品质鉴定分析方法。因此,笔者对该植物药进行了药材性状、显微特征、薄层色谱、黄酮类成分含量测定、总黄酮的提取与纯化、各提取部位的体外抗肿瘤活性等方面的研究,建立了初步的质量分析方法;并与同属近缘植物药(药用植物)垂盆草、佛甲草、凹叶景天进行了薄层色谱的比较研究,同时结合4者茎的显微构造的相似性,初步探讨了相互之间的亲缘关系。性状、显微及薄层色谱鉴定研究表明,珠芽景天鉴别特征明显,如茎横切面的皮层外侧及中柱薄壁组织散布有紫红色细胞,髓部细胞较小,壁不增厚(同属部分植物茎髓部细胞壁增厚);叶下表皮气孔密布,常可见2个(有时3个)相距较近;全草薄层色谱中具多个特征性荧光斑点,并与对照品槲皮素色谱相应位置上有相同颜色的斑点。相对于垂盆草、佛甲草、凹叶景天的显微特征,珠芽景天茎横切面内、外侧皮层细胞壁不增厚,髓部略呈类圆形,细胞壁不增厚,以及叶上、下表皮细胞表面观呈不规则形,壁呈显著的波状弯曲等特征,而易于将本品与上述三个不同来源的同属植物药相区别。薄层色谱中,珠芽景天、凹叶景天与垂盆草、佛甲草相比,相似程度相对较小,推测与它们的亲缘程度略远;而垂盆草、佛甲草绝大部分色谱斑点(共有9个共性色谱斑点)一一对应,加之二者茎的显微构造十分相近,推测二者亲缘关系较为密切。通过HPLC法对样品进行分析,发现珠芽景天的水解产物含有槲皮素、山柰素等黄酮类成分。故以不同采收时间的珠芽景天样品为材料,建立了其槲皮素、山柰素成分的HPLC测定法。该法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(YMC-Pack ODS-A柱,250mm×4.6mm,5μm),甲醇-0.4%磷酸溶液(50:50)为流动相,检测波长为360nm,柱温30℃,流速为1.0mL·min-1,进样量10μL,并进行相应的方法学考察。结果槲皮素、山柰素进样量分别在0.03~0.36μg、0.08~0.96μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(相关系数r=0.9999),平均加样回收率分别为98.90%、98.27%,相对标准差RSD均小于1.70%(n=6)。建立的HPLC法准确可靠、重现性好,可用作珠芽景天有关活性物质含量控制的参考依据。同时对珠芽景天总黄酮的含量进行了测定,测定结果表明,4月下旬的样品中槲皮素、山柰素的含量均明显高于5月与6月样品,4月下旬与5月中旬样品的总黄酮含量高于6月样品,故初步认为该药材以4月下旬至5月中旬采收为宜。珠芽景天总黄酮提取纯化的研究表明,大孔树脂所得的富集物黄酮含量偏低;将过大孔树脂柱后的富集物再过聚酰胺柱,即采用大孔树脂-聚酰胺联用技术具有较好的富集效果,所得黄酮富集物的总黄酮含量达到了52.1%,为进一步研究珠芽景天总黄酮的药理活性奠定了基础。利用四氮唑盐还原法(MTT法),以人的肿瘤细胞(人肝癌细胞株HepG2、人食管癌细胞株EC109、人结肠癌细胞株SW480)为筛选模型,进行了珠芽景天的乙酸乙酯、正丁醇提取部位及总黄酮提取物的体外抗肿瘤活性研究,结果其总黄酮提取物及乙酸乙酯提取部位对3种癌细胞株都有较好的抑制作用,其作用都随着浓度的增加而增强,在测定浓度范围内呈良好的剂量依赖性抑制作用。鉴于已知总黄酮的抗肿瘤活性强,以及黄酮类成分在乙酸乙酯中的含量较高,由此初步判断黄酮类是珠芽景天药材的主要抗肿瘤有效成分。综上所述,笔者对珠芽景天药材进行了较为系统的生药学研究,为该植物药材的鉴定、品质分析、质量标准的建立及资源的开发应用奠定了基础,同时也为景天属其它植物药用的品质鉴定及研究应用提供了一定的参考。
    
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