牛初乳IgG含量测定及免疫胶体金半定量法的建立与应用

Determination of IgG in Bovine Colostrum and Establishment of Immunogold Technique Half-Quantitative Detect and Application

作者: 专业:预防兽医学 导师:王君伟 年度:2005 学位:硕士  院校: 东北农业大学

Keywords

        牛初乳是奶牛正常分娩后最初几天内分泌的乳汁。近年来的研究表明,牛初乳中不仅含有丰富的营养物质,而且含有大量的非营养性功能组分,免疫球蛋白是其中重要成分之一。牛初乳中免疫球蛋白IgG 占86%,为常乳的200 倍,为人类初乳的50 倍,初乳中IgG 含量与其他生物活性物质含量具有一定的正相关性,所以检测IgG 含量是衡量牛初乳及其制品生物活性的最佳方法。采用血清直接过DEAE-纤维素柱法提纯抗体,提纯的抗体经琼脂免疫双扩散和聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,结果显示此法纯化抗体,活性和纯度均较高。采用改良后的琼脂免疫单扩散法检测本地荷斯坦奶牛产后7d 的初乳样品IgG 含量。结果表明:母牛产犊后7d 内,乳汁中IgG 含量变化很大,变动范围为118.59~0.86mg/ml。每次挤乳IgG 含量下降都很快,特别是前三次挤乳,每次IgG 浓度下降率达50%以上;到第8 次,已经降到10mg/ml 以下。所以生产乳制品应以前7 次挤出的初乳为原料最佳,若笼统地以3d、5d 或7d 内初乳为原料,产品中IgG 含量不仅低,而且每批次差异很大。采用柠檬酸酸三钠还原氯金酸,制备了20nm 粒径的胶体金,颗粒均匀,在检测时颜色清晰,易于辨析。胶体金标记蛋白质的最适稳定量为24ug/ml,最适pH 值为9.3。标记后免疫胶体金用含有1%BSA 和0.02%叠氮钠的0.01mol/L 的PBS 作为稳定剂,可使制备的免疫胶体金保存3 个月以上。制作的检测膜片可以在15min 内显示结果,且结果可长期保存。用本方法和琼脂免疫单扩散法对10 份牛初乳样品和6 份牛初乳制品进行检测,结果显示:牛初乳及初乳制品稀释倍数与检测膜片显色同免疫单扩散法测定的结果均有很好的相关性,但灵敏度比琼脂免疫单扩散法低。本法不仅操作过程更为简单快速,不需要特殊仪器和设备;而且检测试剂的制备简单,稳定性高,更适合于作现场实验,因此本方法具有广泛的应用及推广价值。
    
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